關(guān)稅大戰(zhàn)按下暫停鍵，流式er驚魂未定，美國(guó)產(chǎn)試劑漲價(jià)預(yù)警，流式實(shí)驗(yàn)如何降本增效？

Bio X Cell（國(guó)內(nèi)一級(jí)授權(quán)代理商生物）以其高品質(zhì)的體內(nèi)功能級(jí)抗體享-譽(yù)全-球，鮮為人知的是B家還有不少在體外實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用廣泛的隱藏好物，今天我們就來(lái)聊聊用于Fc受體阻斷的抗小鼠CD16/CD32抗體。

為什么要阻斷Fc受體

抗體的結(jié)構(gòu)是一個(gè) Y 型，由高度可變的抗原結(jié)合片段（Fab段，fragment antigen-binding）和可結(jié)晶片段（Fc段，fragment crystallizable）組成，前者負(fù)責(zé)識(shí)別和結(jié)合抗原，后者通過(guò)結(jié)合Fc受體（FcR）介導(dǎo)其他免疫途徑的效應(yīng)功能，比如抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性和吞噬作用，抗原提呈，以及趨化因子和細(xì)胞因子的分泌^[1,2]。

Fc受體的表達(dá)與分類

抗體的恒定區(qū)決定了抗體的同種型，F(xiàn)c受體根據(jù)所結(jié)合的抗體同種型分類，以日常實(shí)驗(yàn)和臨床藥物研發(fā)中使用最多的IgG為例，其Fc受體稱為FcγR。人和小鼠有三個(gè)FcγR亞家族，包括高親和力、能夠結(jié)合單體IgG的FcγRI（CD64），低親和力、主要結(jié)合抗原-抗體免疫復(fù)合物（IC IgG）的FcγRII（CD32）和FcγRIII（CD16）。此外，小鼠還有獨(dú)-特的高親和力 FcγRIV（CD16.2）^[2]。

什么時(shí)候要做Fc受體阻斷

研究高表達(dá)Fc受體的細(xì)胞類型，比如單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，必須要做Fc受體阻斷。Andersen等人詳細(xì)測(cè)定了流式實(shí)驗(yàn)中的Fc受體結(jié)合，發(fā)現(xiàn)人外周血單個(gè)核細(xì)胞和單核來(lái)源巨噬細(xì)胞與小鼠IgG1和IgG2a有很強(qiáng)的非特異結(jié)合，而商業(yè)化Fc 阻斷劑、小鼠或人血清，或是高濃度的小鼠或人IgG都能消除這種非特異信號(hào)[4]。

Bio X Cell隱藏好物，抗小鼠CD16/CD32抗體

大家可能從前面的參考文獻(xiàn)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了，多種試劑都能阻斷Fc受體。其中商品化的Fc受體阻斷劑多為純化的Fc受體的抗體，比如常見(jiàn)的小鼠Fc受體阻斷劑就是小鼠CD16/CD32的抗體，比血清的批間一致性更高，比所有IgG混合物的特異性更強(qiáng)。這里我們推薦B家抗小鼠CD16/CD32抗體，助您實(shí)驗(yàn)降本增效：

Arlauckas等人[6]為了探究為何有時(shí)腫瘤不響應(yīng)PD-1單抗治療，利用體內(nèi)熒光顯微成像追蹤PD-1單抗在腫瘤微環(huán)境中的動(dòng)態(tài)，發(fā)現(xiàn)抗體藥在給藥后幾分鐘內(nèi)即有效結(jié)合瘤浸潤(rùn)的PD-1? CD8? T細(xì)胞，但是隨后從T細(xì)胞表面被腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAM）“搶奪"并內(nèi)吞，限制了藥物的持續(xù)作用。隨后應(yīng)用抗小鼠CD16/CD32抗體進(jìn)行體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)，證實(shí)TAM對(duì)PD-1抗體的“搶奪"依賴于Fc-FcγR的互作。

o  體外共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)：將熒光標(biāo)記的PD-1抗體與T細(xì)胞預(yù)孵育，再與骨髓來(lái)源巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)，在體系中加入抗體阻斷FcγRII/III，能夠顯著減少PD-1抗體熒光從T細(xì)胞向巨噬細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。

o  小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：在PD-1單抗給藥前連續(xù)5天每天腹腔注射200μg小鼠CD16/CD32抗體，阻斷外周巨噬細(xì)胞上的FcγRII/III，顯著延長(zhǎng)PD-1單抗與腫瘤浸潤(rùn)C(jī)D8? T細(xì)胞的結(jié)合時(shí)長(zhǎng)，并且徹-底消除了不響應(yīng)者，聯(lián)合給藥在所有小鼠中實(shí)現(xiàn)腫瘤消除。

圖4 體外共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)PD-1抗體從T細(xì)胞表面向巨噬細(xì)胞的轉(zhuǎn)移由FcγRII/III介導(dǎo)

圖5 體內(nèi)阻斷FcγR在MC38小鼠模型中延長(zhǎng)PD-1單抗與T細(xì)胞的結(jié)合時(shí)長(zhǎng)，提高治療效果