TransIT®-Lenti Transfection Reagent

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【Mirus新品*】TransIT®-Lenti Transfection Reagent——重組慢病毒生產(chǎn)的理想選擇

Mirus公司新推出轉(zhuǎn)染試劑TransIT^®-Lenti Transfection Reagent，該產(chǎn)品適用于將載體轉(zhuǎn)染至貼壁的HEK 293T細(xì)胞中，可提高轉(zhuǎn)染效率，增加重組慢病毒產(chǎn)量。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

高性能——高達(dá)八倍的功能性滴度

操作簡(jiǎn)便——無(wú)需更換培養(yǎng)液基 

無(wú)動(dòng)物源性成分——安全可靠

產(chǎn)品信息

相關(guān)產(chǎn)品*——TransduceIT™ Transduction Reagent

TransduceIT™ Transduction Reagent是一款陽(yáng)離子聚合物試劑，可顯著提高靜止和分裂期的哺乳動(dòng)物細(xì)胞中逆轉(zhuǎn)錄病毒的轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)基因表達(dá)。

產(chǎn)品信息

圖1. TransIT-Lenti轉(zhuǎn)染試劑具有高功能性滴度.分別使用TransIT-Lenti (3:1, vol:wt), Lipofectamine® 2000 (3:1), Lipofectamine® 3000 (3:1:1), 25 kDa PEI (6:1), 和CaPO4 precipitation (4 µg pDNA/well)五種試劑將MISSION®載體（pLKO.1-puro-CMV-TurboGFP™載體和慢病毒包裝試劑）轉(zhuǎn)染至貼壁293T/17細(xì)胞中。收集上清液，過(guò)濾（0.45 µm），用293T/17細(xì)胞滴定。慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)實(shí)驗(yàn)使用了TransduceIT™（8 µg/ml），轉(zhuǎn)導(dǎo)72h后使用guava easyCyte™ 5HT流式細(xì)胞儀檢測(cè)GFP表達(dá)情況。功能性滴度根據(jù)病毒的稀釋液與20% GFP陽(yáng)性細(xì)胞進(jìn)行計(jì)算。

圖2. 使用TransIT-Lenti實(shí)現(xiàn)高效轉(zhuǎn)染. 使用TransIT®-Lenti轉(zhuǎn)染試劑 (3:1, vol:wt)將MISSION®載體（pLKO.1-puro-CMV-TurboGFP™載體和慢病毒包裝試劑）轉(zhuǎn)染至貼壁293T/17細(xì)胞中。轉(zhuǎn)染48h后檢測(cè)GFP效率。圖片于轉(zhuǎn)染48h后拍自熒光顯微鏡。鏡下細(xì)胞變圓和細(xì)胞融合是由于假型化重組慢病毒的VSV-G 蛋白的高表達(dá)。

重組慢病毒顆粒和靶細(xì)胞感染概述

（1） 將包括編碼目的基因、水泡性口炎G蛋白（VSV-G）和必需的病毒蛋白（例如gag，pol和rev）的3-4種質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至生產(chǎn)細(xì)胞（例如293T）中。

（2） 病毒從生產(chǎn)細(xì)胞漿膜以出芽的方式組裝及釋放到上清液中，并以VSV-G的囊膜蛋白包裹。將含有病毒的培養(yǎng)液用0.45微米的濾器進(jìn)行過(guò)濾以除去細(xì)胞。

（3） 重組慢病毒顆粒轉(zhuǎn)導(dǎo)靶細(xì)胞常用陽(yáng)離子聚合物來(lái)增加聚合和攝取。病毒進(jìn)入細(xì)胞后脫衣殼，將RNA基因組和病毒的酶暴露出來(lái)。病毒RNA被逆轉(zhuǎn)錄成DNA，然后整合到宿主基因組中。

（4） 轉(zhuǎn)錄和翻譯后由細(xì)胞產(chǎn)生目的基因所編碼的蛋白質(zhì)。

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